MMP-8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402089-ACT

Il gene umano **MMP8** codifica la metalloproteinasi della matrice 8 (MMP-8), un’endopeptidasi secreta e zinco-dipendente che scinde i collagene fibrillari e altri substrati della matrice extracellulare per regolare il rimodellamento tissutale. L’attività di MMP-8 è integrata con la segnalazione infiammatoria e il reclutamento dei leucociti, intersecandosi con l’organizzazione della matrice extracellulare, il processamento delle chemochine e i processi di riparazione delle ferite. Un’espressione deregolata di MMP-8 o uno squilibrio proteolitico sono stati associati a microambienti infiammatori cronici e a dinamiche stromali alterate in contesti quali la malattia parodontale, l’artrite e il rimodellamento associato ai tumori. In quanto proteasi collegata a biomarcatori nelle risposte immunitarie innate, MMP-8 è spesso studiata per i suoi effetti sulla migrazione cellulare, l’integrità delle barriere e il turnover della matrice.

MMP-8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MMP8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MMP-8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MMP8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MMP8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MMP-8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MMP8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MMP-8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MMP-8 nelle cellule tumorali con espressione di MMP8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.