mitochondrial ferritin Plasmide Double Nickase (m): sc-426664-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mitochondrial ferritin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il mitochondrial ferritin Double Nickase Plasmid (m) e il mitochondrial ferritin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ftmt. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mitochondrial ferritin Plasmide Double Nickase (m) | sc-426664-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Ftmt codifica la ferritina mitocondriale, una proteina che sequestra il ferro localizzata nella matrice mitocondriale, in grado di tamponare il ferro redox-attivo e contribuire a limitare la produzione di specie reattive dell’ossigeno. Immagazzinando il ferro in un guscio di tipo ferritina, Ftmt contribuisce all’omeostasi del ferro mitocondriale, supporta l’integrità della catena respiratoria e influenza vie collegate alle risposte allo stress ossidativo e al controllo di qualità mitocondriale. Alterazioni nella gestione del ferro mitocondriale sono state associate a neurodegenerazione, fenotipi correlati all’anemia e stress metabolico, rendendo Ftmt un locus utile per studiare la suscettibilità alla ferroptosi e la disfunzione mitocondriale nelle cellule dei mammiferi. L’espressione di Ftmt viene inoltre utilizzata come readout in modelli di sovraccarico di ferro e di cambiamenti nel traffico intracellulare del ferro associati all’infiammazione.
mitochondrial ferritin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ftmt nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ftmt. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ftmt. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ftmt interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.