MGRN1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421607

Panoramica

Mgrn1 codifica per la ligasi E3 dell’ubiquitina MGRN1, un regolatore del turnover proteico ubiquitina-dipendente e del traffico endosomiale–lisosomiale nei neuroni e in altri tipi cellulari. MGRN1 modula lo smistamento delle proteine di membrana e l’omeostasi dei recettori, collegando l’ubiquitinazione alle vie di trasporto vescicolare e della proteostasi. Nel topo, alterazioni della funzione di Mgrn1 sono state associate a fenotipi di neurodegenerazione e ad anomalie della pigmentazione, a supporto della sua rilevanza negli studi sul mantenimento neuronale e sulla biologia dei melanosomi. Analizzare la segnalazione ubiquitinica dipendente da MGRN1 è utile per comprendere come difetti nel controllo qualità delle proteine e nel traffico contribuiscano alle risposte cellulari allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MGRN1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mgrn1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mgrn1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mgrn1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MGRN1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mgrn1 per lo studio della segnalazione di MGRN1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mgrn1 critici per la funzione di MGRN1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mgrn1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MGRN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MGRN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mgrn1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MGRN1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MGRN1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mgrn1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mgrn1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.