MFF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402756

Panoramica

L’MFF (mitochondrial fission factor) umano è un adattatore della membrana mitocondriale esterna che recluta la GTPasi correlata alla dinamina DRP1 per promuovere la divisione di mitocondri e perossisomi, modellando la morfologia e la distribuzione degli organelli. Attraverso il controllo dell’equilibrio tra fissione e fusione, MFF influenza l’architettura della rete mitocondriale, la mitofagia, la sensibilità all’apoptosi e la bioenergetica cellulare, con effetti a valle sulla fosforilazione ossidativa, sulla gestione delle ROS e sulla segnalazione da stress. L’alterazione della fissione dipendente da MFF è collegata a dinamiche mitocondriali modificate ed è stata associata a fenotipi di tipo neuroevolutivo e neurodegenerativo, oltre che a disfunzioni metaboliche più ampie in cui risulta compromesso il controllo qualità degli organelli. In quanto nodo centrale nelle vie della dinamica mitocondriale, MFF è spesso studiato in contesti di omeostasi degli organelli, segnalazione dell’immunità innata e decisioni sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MFF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MFF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MFF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MFF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MFF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MFF per lo studio della segnalazione di MFF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MFF critici per la funzione di MFF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MFF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MFF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MFF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MFF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MFF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MFF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MFF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MFF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.