METTL3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404029-NIC

METTL3は、mRNAのN6-メチルアデノシン（m6A）メチルトランスフェラーゼ複合体の触媒コアをコードしており、METTL14やWTAPなどの補因子と協調して、コードRNAおよび非コードRNAにm6A修飾を付加します。このRNA修飾は、転写産物の安定性、スプライシング、核外輸送、翻訳に影響を与え、細胞周期制御、分化、ストレス応答、自然免疫シグナル伝達に関連するプログラムを形作ります。METTL3依存的なm6A制御は、RNA代謝経路や遺伝子発現のエピトランスクリプトミクス制御と交差し、mRNAの運命の変化を介してMAPK、PI3K–AKT、DNA損傷応答ネットワークなどのシグナル出力の調節にも関与します。METTL3活性の破綻は、がん生物学、造血、炎症性環境などにおける多様な疾患関連表現型と関連づけられており、RNAに基づく制御機構の研究において頻繁に標的とされています。

METTL3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における METTL3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、METTL3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、METTL3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、METTL3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。