METTL3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404029-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- METTL3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il METTL3 Double Nickase Plasmid (h) e il METTL3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira METTL3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: METTL3 Antibody (D-9): sc-518180
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
METTL3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404029-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
METTL3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404029-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL3 codifica il nucleo catalitico del complesso metiltransferasico dell’N6-metiladenosina (m6A) sull’mRNA, collaborando con METTL14 e cofattori come WTAP per depositare marcature m6A su RNA codificanti e non codificanti. Questa modifica dell’RNA influenza la stabilità dei trascritti, lo splicing, l’esportazione nucleare e la traduzione, plasmando così programmi legati al controllo del ciclo cellulare, alla differenziazione, alle risposte allo stress e alla segnalazione dell’immunità innata. La regolazione m6A dipendente da METTL3 si intreccia con le vie del metabolismo dell’RNA e con il controllo epitranscrittomico dell’espressione genica, includendo la modulazione di output di segnalazione come le reti MAPK, PI3K–AKT e la risposta al danno del DNA attraverso l’alterazione del destino degli mRNA. Un’attività di METTL3 deregolata è stata associata a diversi fenotipi rilevanti per la malattia in oncologia, ematopoiesi e contesti infiammatori, rendendolo un bersaglio frequente negli studi meccanicistici sulla regolazione basata sull’RNA.
METTL3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus METTL3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di METTL3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di METTL3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con METTL3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.