Plásmido Doble Nickase (h) METTL3: sc-404029-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)METTL3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa METTL3 (h) y el plásmido de doble nickasa METTL3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a METTL3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: METTL3 Anticuerpo (D-9): sc-518180
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) METTL3 | sc-404029-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) METTL3 | sc-404029-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL3 codifica el núcleo catalítico del complejo metiltransferasa de N6-metiladenosina (m6A) del ARNm, asociándose con METTL14 y cofactores como WTAP para instalar marcas m6A en ARN codificantes y no codificantes. Esta modificación del ARN influye en la estabilidad de los transcritos, el empalme (splicing), la exportación nuclear y la traducción, modelando así programas vinculados al control del ciclo celular, la diferenciación, las respuestas al estrés y la señalización inmunitaria innata. La regulación m6A dependiente de METTL3 se entrecruza con vías de metabolismo del ARN y con el control epitranscriptómico de la expresión génica, incluida la modulación de salidas de señalización como MAPK, PI3K–AKT y las redes de respuesta al daño del ADN mediante cambios en el destino del ARNm. La actividad desregulada de METTL3 se ha asociado con diversos fenotipos relevantes para la enfermedad en biología del cáncer, hematopoyesis y contextos inflamatorios, por lo que es un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de regulación basada en ARN.
METTL3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus METTL3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de METTL3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de METTL3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con METTL3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.