METTL3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404029-ACT

METTL3は、mRNAのN6-メチルアデノシン（m6A）ライター複合体の触媒中核をコードしており、通常はMETTL14およびWTAPと協調して、コードRNAおよび非コードRNAにm6Aを付加します。このエピトランスクリプトーム修飾は、pre-mRNAスプライシング、mRNAの核外輸送、安定性、翻訳に影響し、細胞周期の進行、系譜（分化）決定、ストレス適応応答を制御する遺伝子発現プログラムを形成します。METTL3依存的なm6A標識は、RNA代謝、リボソーム生合成、シグナル応答性の転写産物リモデリングを司る経路とも交差します。METTL3活性の破綻やm6Aランドスケープの変化は、複数の疾患関連コンテキストにおける異常な増殖・分化状態と関連づけられており、RNA生物学研究における機序解明の結節点としての活用を後押ししています。

METTL3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性METTL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

METTL3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における METTL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMETTL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性METTL3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMETTL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMETTL3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMETTL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMETTL3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。