METT11D1 Plasmide Double Nickase (h): sc-413022-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- METT11D1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il METT11D1 Double Nickase Plasmid (h) e il METT11D1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira METTL17. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
METT11D1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-413022-NIC | 20 µg | $410.00 |
METTL17 umano (noto anche come METT11D1) codifica una putativa metiltransferasi dipendente dalla S-adenosilmetionina, associata all’espressione genica mitocondriale e al mantenimento della capacità di fosforilazione ossidativa. Evidenze provenienti dalla genomica funzionale supportano un ruolo nella regolazione della traduzione mitocondriale e/o di processi associati ai ribosomi che influenzano l’assemblaggio della catena respiratoria, la produzione di ATP e l’equilibrio redox cellulare. La perturbazione di METTL17 è quindi rilevante per le vie che controllano la proteostasi mitocondriale, il metabolismo energetico e le risposte di segnalazione allo stress. La disfunzione mitocondriale è una caratteristica ricorrente in ambiti di ricerca su neurodegenerazione, metabolismo e cancro, rendendo METTL17 un bersaglio utile per studi meccanicistici dell’omeostasi mitocondriale.
METT11D1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus METTL17 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di METTL17. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di METTL17. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con METTL17 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.