Meis1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401481-ACT

MEIS1 codifica un fattore di trascrizione homeobox di tipo TALE che forma complessi cooperativi con le proteine HOX e PBX per controllare la specificazione di linea, il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche e la definizione dei pattern di sviluppo. Meis1 modula programmi trascrizionali legati al controllo del ciclo cellulare, alla differenziazione e alla regolazione della cromatina, includendo vie che coordinano autorinnovamento e maturazione nelle linee ematiche e neurali. L’espressione deregolata di MEIS1 è spesso studiata nel contesto della leucemogenesi e di stati progenitori aberranti, e studi di associazione genetica implicano reti regolative controllate da MEIS1 in ambito neurobiologico e in tratti legati al sonno. Queste caratteristiche rendono MEIS1 un nodo utile per interrogare i circuiti trascrizionali, la logica degli enhancer e le decisioni di destino in modelli cellulari umani.

Meis1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MEIS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Meis1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MEIS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MEIS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Meis1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MEIS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Meis1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Meis1 nelle cellule tumorali con espressione di MEIS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.