Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ME1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401587-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ME1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ME1 Double Nickase Plasmid (h) e il ME1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ME1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ME1 Antibody (C-6): sc-365891
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ME1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ME1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **ME1** codifica l’enzima malico 1 citosolico dipendente da NADP, che catalizza la decarbossilazione ossidativa del malato a piruvato generando al contempo NADPH. Questa attività sostiene la biosintesi riduttiva e l’omeostasi redox fornendo NADPH per la sintesi di acidi grassi e colesterolo e per i sistemi antiossidanti come glutatione e tioredossina. La funzione di ME1 si integra con il metabolismo centrale del carbonio, collegando la glicolisi, il ciclo dell’acido tricarbossilico e i flussi anaplerotici che influenzano l’equilibrio energetico cellulare. Un’espressione o un’attività deregolata di ME1 è stata associata alla riprogrammazione metabolica in stati proliferativi e ad alterazioni del metabolismo lipidico e a fenotipi di stress ossidativo rilevanti per la ricerca sul cancro e sulle malattie metaboliche.
ME1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ME1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ME1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ME1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ME1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.