MDR1/ABCB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400178-NIC

ABCB1 (MDR1/P-glicoproteina) codifica un trasportatore di efflusso della famiglia ABC (ATP-binding cassette), localizzato prevalentemente sulla membrana plasmatica, dove utilizza l’idrolisi dell’ATP per esportare un’ampia gamma di xenobiotici e metaboliti endogeni. MDR1/ABCB1 contribuisce alle funzioni di barriera epiteliale e di protezione dei tessuti in organi quali intestino, fegato, rene e barriera emato-encefalica, influenzando la distribuzione intracellulare dei farmaci e le risposte cellulari allo stress. La sua attività si intreccia con vie di detossificazione e farmacocinetiche, includendo una regolazione coordinata con la segnalazione dei recettori nucleari (ad es. PXR, CAR) e con i processi di traffico di membrana che controllano l’abbondanza del trasportatore sulla superficie cellulare. Un’espressione o una funzione alterata di ABCB1 è spesso studiata nel contesto dei fenotipi di resistenza multidrug in modelli di cancro e della variabilità della risposta ai farmaci nei diversi tessuti.

MDR1/ABCB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.