MCM2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400959-ACT

O MCM2 humano codifica uma subunidade central do complexo helicase MCM2–7, que licencia as origens de replicação e impulsiona o desenrolamento do DNA durante a fase S. A função de MCM2 é integrada à montagem do complexo de pré-replicação, ao controle de checkpoints e às respostas ao estresse replicativo coordenadas pela sinalização ATR/CHK1, para preservar a integridade do genoma. Alterações na expressão ou na atividade de MCM2 estão frequentemente associadas à proliferação aberrante, à instabilidade genômica e a fenótipos de estresse replicativo observados em diversos contextos de câncer e doenças hiperproliferativas. Como fator de licenciamento da replicação, o MCM2 é amplamente utilizado para investigar a progressão do ciclo celular, a sinalização de dano ao DNA e a dinâmica de replicação associada à cromatina.

MCM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MCM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCM2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MCM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MCM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCM2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MCM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCM2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCM2 em células tumorais com expressão de MCM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.