Matrilin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406830

Panoramica

MATN1 codifica la matrilina-1, una proteina adattatrice della matrice extracellulare arricchita nella cartilagine, che contribuisce a organizzare la matrice pericellulare collegando collagene e proteoglicani in reti sopramolecolari. La matrilina-1 contribuisce alla differenziazione dei condrociti, all’integrità strutturale della cartilagine e all’assemblaggio della matrice extracellulare durante la scheletrogenesi e l’ossificazione endocondrale. Grazie ai suoi domini modulari e alla capacità di multimerizzare, partecipa ai processi di rimodellamento della matrice che influenzano la biomeccanica tissutale e la segnalazione cellula–matrice. Alterazioni dell’espressione di MATN1 o dell’organizzazione della matrice sono studiate nel contesto della degenerazione cartilaginea e di disturbi scheletrici e articolari ereditari o acquisiti, in cui l’omeostasi della matrice extracellulare risulta compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Matrilin-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MATN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MATN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MATN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Matrilin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MATN1 per lo studio della segnalazione di Matrilin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MATN1 critici per la funzione di Matrilin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MATN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Matrilin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Matrilin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MATN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Matrilin-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Matrilin-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MATN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MATN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.