MARCH9 Plasmide Double Nickase (h): sc-410240-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MARCH9 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MARCH9 Double Nickase Plasmid (h) e il MARCH9 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MARCH9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MARCH9 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410240-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MARCH9 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410240-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARCH9 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina RING-CH associata alla membrana, che si localizza in compartimenti endomembranosi e regola il turnover proteico tramite smistamento e degradazione dipendenti dall’ubiquitina. Catalizzando l’ubiquitinazione di specifiche proteine di membrana, MARCH9 contribuisce al traffico endocitico, al targeting lisosomiale e ai processi di controllo qualità che modellano la disponibilità dei recettori e le dinamiche della segnalazione intracellulare. Queste attività collegano MARCH9 a vie che governano la regolazione di proteine di membrana legate all’immunità e l’omeostasi cellulare, in cui un’alterata funzione della ligasi dell’ubiquitina può influenzare le risposte allo stress e il rimodellamento del proteoma di superficie cellulare. La disregolazione dell’ubiquitinazione e del traffico delle proteine di membrana è rilevante per studi meccanicistici della segnalazione immunitaria, delle risposte dell’ospite associate alle infezioni e di perturbazioni più ampie della proteostasi osservate in diversi contesti patologici.
MARCH9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MARCH9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MARCH9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MARCH9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MARCH9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.