MARCH8 Plasmide Double Nickase (m): sc-428061-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MARCH8 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MARCH8 Double Nickase Plasmid (m) e il MARCH8 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira March8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MARCH8 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MARCH8 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
March8 codifica MARCH8, una ligasi E3 dell’ubiquitina RING-CH associata alle membrane, localizzata principalmente su membrane endosomiali e del trans-Golgi, che regola il traffico e il turnover, dipendenti dall’ubiquitinazione, di numerose proteine di superficie cellulare e intracellulari. Promuovendo lo smistamento mediato dall’ubiquitina verso la degradazione lisosomiale, MARCH8 contribuisce a controllare l’abbondanza dei recettori, gli output della segnalazione immunitaria e il controllo di qualità delle proteine di membrana all’interno del sistema endolisosomiale. Nei modelli murini, MARCH8 è stata collegata a vie che regolano la presentazione dell’antigene, la restrizione innata dei virus con envelope e la modulazione dei recettori di segnalazione tramite processi associati all’ubiquitina–proteasoma e al lisosoma. L’alterazione dell’ubiquitinazione e del traffico di membrana è ampiamente rilevante per fenotipi infiammatori e interazioni patogeno–ospite, rendendo March8 un locus utile per studi meccanicistici sulla regolazione immunitaria e sull’omeostasi proteica.
MARCH8 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus March8 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di March8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di March8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con March8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.