MAPKAPK-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401158-ACT

MAPKAPK2 codifica la protein chinasi 2 attivata da MAPK (MAPKAPK-2), una chinasi Ser/Thr che agisce come principale effettore della via di risposta allo stress p38 MAPK. Una volta attivata da MAPK14/p38, MAPKAPK-2 fosforila substrati quali HSPB1 e componenti coinvolti nella stabilità dell’mRNA e nel controllo della traduzione, collegando lo stress ambientale al rimodellamento del citoscheletro e ai programmi di espressione genica infiammatoria. Questo asse di segnalazione regola la produzione di citochine e le risposte immunitarie innate tramite meccanismi di controllo post-trascrizionale, e interseca i checkpoint del ciclo cellulare e l’apoptosi in condizioni di stress genotossico o ossidativo. Un’attività deregolata di MAPKAPK-2 è stata implicata in fenotipi infiammatori cronici e nella biologia di malattie associate allo stress, rendendola un nodo rilevante per studi meccanicistici della regolazione trascrizionale e post-trascrizionale guidata dalla segnalazione.

MAPKAPK-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPKAPK2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAPKAPK-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPKAPK2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPKAPK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAPKAPK-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPKAPK2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAPKAPK-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAPKAPK-2 nelle cellule tumorali con espressione di MAPKAPK2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.