MALT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400791-ACT

MALT1 umano (mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma translocation protein 1) è una paracaspasi che funge da nodo centrale di segnalazione a valle dei recettori dell’antigene nei linfociti, integrando i segnali provenienti dal complesso CARD11–BCL10–MALT1 (CBM) per indurre l’attivazione canonica delle vie NF-κB e MAPK. Oltre alla sua attività di scaffold, la proteasi MALT1 cliva selettivamente alcuni substrati per modulare l’attivazione di cellule T e B, la produzione di citochine e i programmi di sopravvivenza. Una segnalazione di MALT1 deregolata è associata a un’attivazione immunitaria aberrante ed è implicata nella biologia delle neoplasie linfoidi attraverso programmi trascrizionali dipendenti da NF-κB alterati. Modulare l’espressione di MALT1 è quindi utile per analizzare la trascrizione dipendente dal segnale, l’architettura delle vie dei recettori immunitari e la regolazione contestuale dei geni infiammatori.

MALT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MALT1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MALT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MALT1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MALT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MALT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MALT1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MALT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MALT1 nelle cellule tumorali con espressione di MALT1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.