MAGE-D4 Plasmide Double Nickase (h): sc-418394-NIC

MAGED4 codifica per il membro D4 della famiglia degli antigeni del melanoma (MAGE-D4), una proteina associata ai tumori/testicolo implicata nella regolazione dei programmi di crescita cellulare e della segnalazione adattativa allo stress. Le proteine MAGE possono agire come modulatori del turnover proteico dipendente dall’ubiquitina attraverso interazioni con ligasi E3 dell’ubiquitina, influenzando così la stabilità delle proteine, il controllo trascrizionale e la progressione del ciclo cellulare. Un’espressione aberrante di MAGED4 è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è spesso studiata nel contesto del rimodellamento delle vie oncogeniche, della proliferazione e della fitness delle cellule tumorali. In quanto membro di una famiglia antigenica umana, MAGE-D4 è rilevante anche per studi sull’espressione genica associata al tumore e per la profilazione molecolare immuno-correlata in sistemi modello.

MAGE-D4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAGED4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAGED4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAGED4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAGED4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.