MAFbx Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400908

Panoramica

FBXO32 codifica la proteina umana F-box dell’atrofia muscolare MAFbx (nota anche come Atrogin-1), un componente della ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box) che conferisce specificità di substrato alla degradazione proteasomiale dipendente dall’ubiquitina. MAFbx è fortemente indotta durante stati catabolici e contribuisce al rimodellamento della proteostasi prendendo di mira regolatori della differenziazione e della crescita muscolare, collegandosi così a vie a valle dei fattori di trascrizione FOXO, del segnale IGF-1/AKT e delle risposte cellulari allo stress. Attraverso il suo ruolo nell’attività del sistema ubiquitina–proteasoma, FBXO32 è ampiamente studiato in contesti di deperimento e rimodellamento muscolare, inclusi l’atrofia associata alla cachessia e la perdita muscolare correlata al disuso. Un’alterata attività di FBXO32/MAFbx è inoltre rilevante per comprendere l’adattamento del muscolo scheletrico, lo stress metabolico e gli input di segnalazione infiammatoria che convergono sul turnover proteico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAFbx (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FBXO32 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FBXO32 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FBXO32 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAFbx.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FBXO32 per lo studio della segnalazione di MAFbx, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FBXO32 critici per la funzione di MAFbx
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FBXO32 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MAFbx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MAFbx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FBXO32. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MAFbx Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MAFbx (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FBXO32 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FBXO32 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.