mAChR M2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402394-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- mAChR M2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il mAChR M2 Double Nickase Plasmid (h) e il mAChR M2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CHRM2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: mAChR M2 Antibody (M2-2-B3): sc-33712
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
mAChR M2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM2 codifica il recettore muscarinico umano dell’acetilcolina M2 (mAChR M2), un GPCR accoppiato a Gi/o che attenua l’attività dell’adenilato ciclasi, riduce la segnalazione cAMP/PKA e modula la conduttanza dei canali ionici per regolare l’eccitabilità cellulare e la secrezione. Nel tessuto cardiaco contribuisce al controllo parasimpatico della frequenza cardiaca e della conduzione atrioventricolare, mentre nel sistema nervoso centrale modella la trasmissione sinaptica e l’attività delle reti neuronali. La segnalazione a valle interseca vie correlate a MAPK e PI3K e può influenzare l’omeostasi del calcio e il rilascio di neurotrasmettitori. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di CHRM2 sono state studiate in contesti che includono la fisiologia legata alle aritmie, fenotipi neuropsichiatrici e reti di segnalazione colinergica associate ai tumori.
mAChR M2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRM2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.