LYPLA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-409535-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LYPLA3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LYPLA3 Double Nickase Plasmid (h) e il LYPLA3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PLA2G15. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LYPLA3 Antibody (B-2): sc-376078
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LYPLA3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409535-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LYPLA3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-409535-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLA2G15 codifica la lisofosfolipasi A3 (LYPLA3), un’idrolasi serinica implicata nella deacilazione dei lisofosfolipidi e nel rimodellamento dei pool lipidici cellulari. Regolando il turnover di lisofosfolipidi e acidi grassi, LYPLA3 può influenzare la dinamica delle membrane, l’omeostasi delle goccioline lipidiche e le vie di segnalazione lipidica a valle che collegano il metabolismo alle risposte infiammatorie e allo stress. Un’attività lisofosfolipasica alterata è stata studiata nel contesto di metabolismo lipidico deregolato, stress ossidativo e fenotipi di segnalazione immunitaria. La LYPLA3 umana è quindi di interesse per analizzare le reti enzimatiche lipidiche e il loro contributo a stati cellulari rilevanti per la malattia in modelli meccanicistici.
LYPLA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLA2G15 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLA2G15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLA2G15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLA2G15 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.