Ly-6K Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404264-ACT

Il gene umano **LY6K** codifica **Ly-6K**, una proteina di superficie della famiglia **Ly6/uPAR** ancorata tramite **glicosilfosfatidilinositolo (GPI)**, implicata nella segnalazione cellula-cellula e nell’organizzazione dei microdomini di membrana. L’espressione di Ly-6K è stata associata alla regolazione del comportamento delle cellule epiteliali, inclusi migrazione e fenotipi invasivi, ed è spesso studiata nel contesto di programmi genici associati ai tumori e di interazioni del microambiente legate al sistema immunitario. In quanto molecola di superficie cellulare, Ly-6K è rilevante per le vie che governano l’adesione, il cross-talk tra recettori e il rimodellamento delle reti di segnalazione che influenzano proliferazione e sopravvivenza. Il suo profilo di espressione ristretto in molti tessuti normali e l’espressione elevata in molteplici tumori rendono **LY6K** un marcatore utile e un nodo funzionale per la ricerca oncologica meccanicistica e lo studio di biomarcatori.

Ly-6K Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LY6K senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ly-6K Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LY6K nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LY6K, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ly-6K. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LY6K nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ly-6K nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ly-6K nelle cellule tumorali con espressione di LY6K silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.