Lsk Plasmide Double Nickase (h): sc-403533-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Lsk Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Lsk Double Nickase Plasmid (h) e il Lsk Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MATK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Lsk/Ctk Antibody (H-1): sc-271174
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Lsk Plasmide Double Nickase (h) | sc-403533-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lsk Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403533-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MATK codifica la tirosin-chinasi non recettoriale Lsk, un regolatore citoplasmatico della segnalazione, arricchito in contesti ematopoietici ed epiteliali. Lsk modula reti dipendenti dalla fosforilazione che si intersecano con le chinasi della famiglia Src e con la segnalazione prossimale ai recettori, influenzando processi quali il controllo della crescita cellulare, la differenziazione e la segnalazione in risposta allo stress. MATK è stata implicata nella modulazione fine di vie guidate da chinasi rilevanti per stati di segnalazione oncogenica, rendendola un bersaglio utile per studiare circuiti di fosforilazione deregolati nella biologia del cancro e in modelli di specificazione di linea. L’analisi della funzione di MATK supporta lo studio meccanicistico del crosstalk tra chinasi e del riassetto delle vie di segnalazione nelle cellule umane.
Lsk Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MATK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MATK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MATK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MATK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.