LRP6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400844

Panoramica

LRP6 (proteina 6 correlata al recettore delle lipoproteine a bassa densità) è un co-recettore transmembrana a singolo passaggio essenziale per la segnalazione canonica Wnt/β-catenina, formando complessi indotti dal ligando con i recettori Frizzled per favorire il reclutamento di Dishevelled e l’inibizione del complesso di distruzione della β-catenina. Attraverso questa via, LRP6 regola la patterning embrionale, il mantenimento delle cellule staminali, la proliferazione e la differenziazione cellulare, e può integrare segnali provenienti da antagonisti extracellulari quali DKK e sclerostina, che modulano la disponibilità del recettore. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di LRP6 sono state associate a una deregolazione della segnalazione Wnt osservata in contesti diversi, tra cui la biologia dei tumori, i fenotipi ossei e metabolici e i processi di neurosviluppo. In quanto nodo di segnalazione prossimale alla membrana, LRP6 viene spesso studiata per analizzare il traffico recettoriale, l’assemblaggio del signalosoma e il crosstalk tra vie che influenzano i programmi trascrizionali a valle della β-catenina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LRP6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LRP6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LRP6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRP6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LRP6 per lo studio della segnalazione di LRP6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LRP6 critici per la funzione di LRP6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LRP6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LRP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LRP6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRP6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LRP6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LRP6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LRP6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.