LRP5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401331-LAC

LRP5 (proteina 5 correlata al recettore delle lipoproteine a bassa densità) è un co-recettore transmembrana a singolo passaggio che coopera con i recettori Frizzled per trasdurre la segnalazione canonica Wnt/β-catenina. Regolando la stabilizzazione della β-catenina e la trascrizione dipendente da TCF/LEF, LRP5 influenza la differenziazione degli osteoblasti, l’acquisizione della massa ossea e l’omeostasi tissutale, e contribuisce anche alla regolazione metabolica e alla biologia vascolare. Alterazioni genetiche e funzionali di LRP5 sono associate a fenotipi scheletrici e a disturbi della densità ossea, e una segnalazione Wnt/LRP5 alterata è stata implicata nella tumorigenesi e in altre patologie che coinvolgono una proliferazione e una differenziazione disregolate. LRP5 è quindi ampiamente studiata nei pathway che governano la segnalazione dello sviluppo, la meccano-trasduzione nell’osso e i programmi trascrizionali guidati da Wnt.

Le particelle di attivazione lentivirale LRP5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di LRP5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LRP5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione LRP5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LRP5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo LRP5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.