LRP4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401708-ACT

LRP4 (protein 4 correlata al recettore delle lipoproteine a bassa densità) è un recettore transmembrana a singolo passaggio che funge da organizzatore chiave della segnalazione dei ligandi extracellulari sulla superficie cellulare. Nei tessuti umani, LRP4 partecipa a reti di segnalazione mediate da Wnt e agrina che regolano l’organizzazione delle sinapsi, il clustering dei recettori e la strutturazione dei tessuti, supportando processi quali la formazione della giunzione neuromuscolare e l’omeostasi scheletrica. Attraverso interazioni con ligandi secreti e co-recettori, LRP4 influenza programmi trascrizionali a valle che controllano la comunicazione cellula-cellula e la segnalazione nello sviluppo. Un’espressione o una funzione deregolate di LRP4 sono state associate a fenotipi neuromuscolari e ossei, rendendola un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della segnalazione sinaptica e della biologia muscoloscheletrica.

LRP4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LRP4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LRP4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LRP4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LRP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LRP4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LRP4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LRP4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LRP4 nelle cellule tumorali con espressione di LRP4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.