LRP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421464-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LRP1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LRP1 Double Nickase Plasmid (m) e il LRP1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lrp1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LRP1 Antibody (8G1): sc-57353
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LRP1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRP1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina 1 correlata al recettore delle lipoproteine a bassa densità (LRP1), codificata nel topo dal gene *Lrp1*, è un recettore endocitico e di segnalazione multifunzionale che coordina l’assorbimento di numerosi ligandi, tra cui lipoproteine, complessi proteasi–inibitore e componenti della matrice extracellulare. Attraverso interazioni con proteine adattatrici e co-recettori, LRP1 influenza l’endocitosi mediata da clatrina, il rimodellamento del citoscheletro e vie di trasduzione del segnale come PI3K–AKT e MAPK, modulando la migrazione e la sopravvivenza cellulare. *Lrp1* modula inoltre la proteolisi extracellulare regolando uPA/uPAR e l’attività delle metalloproteinasi della matrice, collegando il traffico del recettore al rimodellamento tissutale. Una funzione deregolata di LRP1 è stata associata a fenomeni di neurobiologia, a fenotipi vascolari e metabolici e a processi del microambiente tumorale, rendendolo un nodo ampiamente studiato nelle reti di clearance omeostatica e di segnalazione cellulare.
LRP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lrp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lrp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lrp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lrp1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.