Loricrin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402452-ACT

Il gene umano **LOR** codifica la **loricrina**, una proteina strutturale altamente abbondante dell’involucro corneo che sostiene la formazione della barriera epidermica durante la differenziazione terminale dei cheratinociti. La loricrina viene estesamente reticolata dalle transglutaminasi e si integra con altri componenti dell’involucro per rafforzare lo strato corneo e mantenere la resilienza del tessuto. La sua espressione è coordinata all’interno di programmi di differenziazione epidermica che coinvolgono le vie della cheratinizzazione e della cornificazione, incluse reti trascrizionali che regolano i geni della differenziazione tardiva. Un’espressione deregolata di **LOR** o un’alterata assemblaggio dell’involucro corneo è associata a una funzione di barriera compromessa ed è stata collegata a patologie cutanee ereditarie e infiammatorie, rendendola rilevante per studi sull’omeostasi epidermica e sui meccanismi di malattia.

Loricrin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LOR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Loricrin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LOR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LOR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Loricrin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LOR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Loricrin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Loricrin nelle cellule tumorali con espressione di LOR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.