Lipin-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420378-NIC

Il gene murino Lpin1 codifica Lipin-1, una fosfatidato fosfatasi (PAP1) dipendente da Mg²⁺ che converte l’acido fosfatidico in diacilglicerolo, collegando la biosintesi dei glicerolipidi al rimodellamento dei lipidi di membrana e alla segnalazione lipidica. Oltre al suo ruolo enzimatico, Lipin-1 può influenzare programmi trascrizionali che regolano l’ossidazione dei lipidi e il metabolismo mitocondriale, integrando lo stato nutrizionale con l’espressione genica metabolica. L’attività di Lpin1 influisce sulla differenziazione degli adipociti, sulla gestione epatica dei lipidi e sull’omeostasi energetica del muscolo scheletrico; la sua disregolazione è associata, in modelli sperimentali, a fenotipi simili alla lipodistrofia, steatosi epatica, insulino-resistenza e stress metabolico infiammatorio. Queste funzioni rendono Lipin-1 un nodo chiave per lo studio delle vie del metabolismo lipidico, del crosstalk tra reticolo endoplasmatico e mitocondri e dei meccanismi alla base delle malattie metaboliche.

Lipin-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lpin1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lpin1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lpin1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lpin1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.