Lingo-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404453

Panoramica

LINGO1 codifica Lingo-1, una proteina transmembrana arricchita nel sistema nervoso centrale (SNC), contenente ripetizioni ricche in leucina e domini immunoglobulinici, che funge da componente di complessi recettoriali coinvolti nella regolazione della crescita neuronale e della mielinizzazione. Lingo-1 interagisce con la segnalazione del recettore di Nogo e con vie correlate per modulare la guida assonale, la crescita dei neuriti, la differenziazione degli oligodendrociti e il rimodellamento del citoscheletro. Attraverso effetti sulla comunicazione neurone–glia e sui segnali inibitori nel sistema nervoso, LINGO1 è stato studiato nel contesto della demielinizzazione, del fallimento della rigenerazione assonale e di processi associati alla neurodegenerazione. Un’espressione o una segnalazione alterata di LINGO1 è stata inoltre esplorata per il suo potenziale impatto sulla plasticità sinaptica e sulle risposte neuroinfiammatorie in modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Lingo-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LINGO1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LINGO1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LINGO1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Lingo-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LINGO1 per lo studio della segnalazione di Lingo-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LINGO1 critici per la funzione di Lingo-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LINGO1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Lingo-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Lingo-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LINGO1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Lingo-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Lingo-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LINGO1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LINGO1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.