LGR5 Plasmide Double Nickase (h): sc-400726-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LGR5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LGR5 Double Nickase Plasmid (h) e il LGR5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LGR5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LGR5 Antibody (634J2E): sc-517661
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LGR5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400726-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LGR5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400726-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LGR5 (recettore accoppiato a proteina G 5 contenente ripetizioni ricche di leucina) è un recettore di superficie cellulare responsivo a WNT/β-catenina, ampiamente utilizzato come marcatore di popolazioni di cellule staminali adulte e progenitrici nei tessuti epiteliali. In collaborazione con le R-spondine e i recettori Frizzled/LRP, LGR5 potenzia la segnalazione WNT canonica per regolare l’autorinnovamento, l’omeostasi cripta–villo e l’impegno di linea. Una segnalazione associata a LGR5 deregolata è stata collegata ad alterazioni di stati di tipo staminale, a proliferazione aberrante e a cambiamenti nei programmi di differenziamento osservati in molteplici contesti di tumori solidi. Queste proprietà rendono LGR5 un bersaglio utile per analizzare la dinamica delle cellule staminali, la segnalazione della nicchia e la modulazione della via WNT in modelli cellulari umani.
LGR5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LGR5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LGR5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LGR5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LGR5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.