LEPROTL1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405575-ACT

LEPROTL1 (leptin receptor overlapping transcript-like 1) codifica una piccola proteina transmembrana implicata nella regolazione del traffico recettoriale e dello smistamento endosomiale, influenzando l’abbondanza e la competenza di segnalazione dei recettori presenti sulla superficie cellulare. Modulando l’internalizzazione e il riciclo, LEPROTL1 può plasmare le vie a valle legate alla risposta ai fattori di crescita e alla segnalazione delle citochine, con effetti più ampi sul metabolismo cellulare e sul controllo della proliferazione. Un’espressione alterata di LEPROTL1 è stata riportata in diversi studi di profilazione molecolare in contesti di patologia umana, a supporto del suo utilizzo come nodo meccanicistico per indagare la disregolazione dell’omeostasi dei recettori. Questo rende LEPROTL1 rilevante per studi sul turnover delle proteine di membrana, sull’attenuazione del segnale e sul rimodellamento delle vie di segnalazione in condizioni di stress e associate a malattia.

LEPROTL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LEPROTL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LEPROTL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LEPROTL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LEPROTL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LEPROTL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LEPROTL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LEPROTL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LEPROTL1 nelle cellule tumorali con espressione di LEPROTL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.