LDLR Plasmide Double Nickase (m): sc-421408-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LDLR Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LDLR Double Nickase Plasmid (m) e il LDLR Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ldlr. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LDLR Antibody (C7): sc-18823
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LDLR Plasmide Double Nickase (m) | sc-421408-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Ldlr** codifica il recettore delle lipoproteine a bassa densità (LDLR), un recettore endocitico di membrana cellulare che rimuove le particelle LDL circolanti tramite internalizzazione mediata da clatrina negli epatociti e in altri tessuti. LDLR regola l’assorbimento del colesterolo e contribuisce all’omeostasi lipidica modulando la disponibilità intracellulare di steroli, che a sua volta esercita un feedback sui programmi trascrizionali controllati da SREBP e su vie più ampie del metabolismo delle lipoproteine. L’alterazione o la ridotta attività di LDLR è classicamente associata a fenotipi di dislipidemia e a processi biologici rilevanti per l’aterosclerosi, rendendo **Ldlr** un nodo centrale per lo studio del traffico del colesterolo e della regolazione lipidica sistemica in vivo e in cellule coltivate. La perturbazione sperimentale di **Ldlr** è comunemente utilizzata per analizzare la cinetica di uptake delle particelle LDL, il riciclo del recettore e le reti geniche a valle sensibili agli steroli.
LDLR Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ldlr nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ldlr. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ldlr. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ldlr interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.