L-type Ca⁺⁺ CP β4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419412

Panoramica

Cacnb4 codifica la subunità ausiliaria β4 dei canali del calcio di tipo L voltaggio-dipendenti, regolando il traffico dei canali, la stabilità di membrana e la cinetica di gating che modellano l’ingresso di Ca²⁺ nei tessuti eccitabili. Modulando l’entrata di calcio dipendente dall’attività, β4 influenza le cascate di segnalazione Ca²⁺-dipendenti che collegano la depolarizzazione di membrana al rilascio di neurotrasmettitori, alla trascrizione genica e alla plasticità sinaptica. Nei modelli murini, un’alterata funzione di Cacnb4 perturba l’eccitabilità neuronale e la sincronizzazione delle reti, collegando questa via a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, nonché alla suscettibilità alle crisi epilettiche. Il ruolo della proteina nel controllare la composizione dei canali del calcio la rende inoltre rilevante per studi sulla maturazione dei circuiti e sulle risposte di stress cellulare dipendenti dall’attività.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP β4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cacnb4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cacnb4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cacnb4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina L-type Ca++ CP β4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cacnb4 per lo studio della segnalazione di L-type Ca++ CP β4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cacnb4 critici per la funzione di L-type Ca++ CP β4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cacnb4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal L-type Ca++ CP β4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cacnb4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal L-type Ca++ CP β4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR L-type Ca++ CP β4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cacnb4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cacnb4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.