Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
L-type Ca++ CP α1D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401745
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- L-type Ca++ CP α1D Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico L-type Ca++ CP α1D, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: L-type Ca++ CP α1D Antibody (E-3): sc-515679
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
L-type Ca++ CP α1D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401745 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CACNA1D codifica la subunità α1D (CaV1.3) costituente il poro dei canali del calcio di tipo L voltaggio-dipendenti, che collegano la depolarizzazione di membrana all’ingresso di Ca2+ e alla conseguente segnalazione Ca2+-dipendente. CaV1.3 contribuisce all’accoppiamento eccitazione–trascrizione modulando la dinamica del Ca2+ citosolico che regola le vie calcio/calmodulina, le cascate di chinasi e i programmi di espressione genica dipendenti dall’attività. Nelle cellule eccitabili e non eccitabili, l’attività di CACNA1D influenza la differenziazione cellulare, la secrezione e le proprietà elettrofisiologiche attraverso la modulazione dell’omeostasi del calcio. Alterazioni genetiche e regolatorie di CACNA1D sono state associate a disturbi caratterizzati da segnalazione elettrica aberrante e da un controllo trascrizionale Ca2+-dipendente alterato, a supporto di studi meccanicistici della funzione del canale in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1D (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CACNA1D in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CACNA1D insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CACNA1D a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina L-type Ca++ CP α1D.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CACNA1D per lo studio della segnalazione di L-type Ca++ CP α1D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CACNA1D critici per la funzione di L-type Ca++ CP α1D
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CACNA1D per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CACNA1D. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal L-type Ca++ CP α1D Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR L-type Ca++ CP α1D (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CACNA1D per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CACNA1D definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.