Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
KRAS Plasmide Double Nickase (h): sc-416674-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KRAS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KRAS Double Nickase Plasmid (h) e il KRAS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KRAS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KRAS Antibody (F234): sc-30
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KRAS Plasmide Double Nickase (h) | sc-416674-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KRAS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416674-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRAS codifica una piccola GTPasi che agisce come interruttore molecolare a valle delle tirosin-chinasi recettoriali, alternando ciclicamente stati legati a GDP e a GTP per regolare la propagazione del segnale. KRAS attivo ingaggia le vie RAF–MEK–ERK (MAPK) e PI3K–AKT–mTOR per coordinare proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e rimodellamento metabolico. Attraverso il crosstalk con RalGDS e con i regolatori del citoscheletro, KRAS influenza anche il traffico vescicolare, la migrazione e le risposte cellulari allo stress. Una segnalazione di KRAS deregolata è una caratteristica centrale del rimodellamento delle reti oncogeniche ed è ampiamente rilevante per gli studi sull’iniziazione tumorale, l’adattamento e le dipendenze di via.
KRAS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRAS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRAS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRAS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRAS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.