KLRG1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424537-ACT

Il gene murino *Klrg1* codifica KLRG1, un recettore inibitorio di tipo lectin-like (simile alle lectine C) espresso in modo marcato su sottopopolazioni effettorie differenziate e di memoria delle cellule NK e delle cellule T CD8+. Legandosi alle caderine classiche, come l’E-caderina, presenti sulle cellule bersaglio, KLRG1 trasduce segnali inibitori che modulano citotossicità, produzione di citochine e capacità proliferativa, collegando i segnali di adesione a una regolazione di tipo “immune checkpoint”. KLRG1 è ampiamente utilizzato come marcatore di maturazione e dello stato funzionale delle cellule immunitarie, e alterazioni della sua segnalazione sono state associate a cambiamenti nelle risposte immunitarie antivirali e antitumorali, all’invecchiamento del sistema immunitario e all’infiammazione cronica. Queste caratteristiche rendono *Klrg1* un nodo rilevante per studiare la regolazione immunitaria, la sorveglianza tissutale e la persistenza delle cellule effettrici in modelli di malattia.

KLRG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Klrg1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KLRG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Klrg1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Klrg1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KLRG1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Klrg1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KLRG1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KLRG1 nelle cellule tumorali con espressione di Klrg1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.