KIF13A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403751-ACT

KIF13A codifica un motore dei microtubuli della famiglia kinesina-3 che supporta il trasporto di vescicole e complessi proteici diretto verso l’estremità plus, contribuendo al traffico polarizzato e all’organizzazione del citoscheletro. L’attività di KIF13A è collegata a processi di trasporto endosomiale e di membrana che influenzano la polarità cellulare, la dinamica della segnalazione e il controllo spaziale della consegna dei carichi. Attraverso il suo ruolo nel trasporto intracellulare, KIF13A può incidere su vie che regolano la distribuzione dei recettori di membrana e l’integrità delle giunzioni. Un’alterata regolazione di questi processi è stata associata a fenotipi rilevanti per l’infiammazione, la funzione della barriera epiteliale e altri contesti in cui è critica una segnalazione dipendente dal traffico.

KIF13A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KIF13A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KIF13A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KIF13A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KIF13A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KIF13A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KIF13A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KIF13A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KIF13A nelle cellule tumorali con espressione di KIF13A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.