KCC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402080

Panoramica

SLC12A5 codifica per il cotrasportatore neuronale specifico K+-Cl− KCC2, un regolatore chiave dell’omeostasi intracellulare del cloruro che consente la neurotrasmissione GABAergica e glicinergica iperpolarizzante. Promuovendo l’estrusione di Cl−, KCC2 modella la forza sinaptica inibitoria, l’eccitabilità di membrana e la maturazione dei circuiti neurali, e interagisce funzionalmente con vie di trasporto ionico e di segnalazione sinaptica che regolano la plasticità dipendente dall’attività. Alterazioni dell’espressione o della funzione di KCC2 sono state associate a uno squilibrio tra eccitazione e inibizione nel sistema nervoso centrale, a supporto della sua rilevanza negli studi su epilessia, disturbi del neurosviluppo, dolore neuropatico e neurodegenerazione. KCC2 è inoltre utilizzato come marcatore e nodo meccanicistico per indagare lo sviluppo delle sinapsi inibitorie, la dinamica del cloruro e le oscillazioni di rete.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KCC2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC12A5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC12A5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC12A5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KCC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC12A5 per lo studio della segnalazione di KCC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC12A5 critici per la funzione di KCC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC12A5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KCC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KCC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC12A5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KCC2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KCC2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC12A5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC12A5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.