JMJD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-401883-KO-2

Panoramica

KDM6B codifica la demetilasi istonica JMJD3, una diossigenasi dipendente da Fe(II)/2-ossoglutarato che rimuove i segni repressivi H3K27me3 per promuovere l’attivazione trascrizionale. Attraverso il rimodellamento epigenetico, JMJD3 influenza programmi genici dello sviluppo, transizioni di destino cellulare, senescenza e trascrizione responsiva agli stimoli a valle di vie di segnalazione quali NF-κB e TGF-β/SMAD. La sua attività modella l’accessibilità della cromatina in enhancer e promotori specifici di linea, contribuendo alla regolazione dell’infiammazione e della differenziazione in molteplici tipi cellulari. Una funzione deregolata di KDM6B/JMJD3 è stata implicata nell’epigenetica del cancro, nella biologia delle malattie immuno-mediate e in altri contesti in cui stati di cromatina aberranti alterano le reti di espressione genica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD3 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KDM6B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KDM6B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KDM6B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina JMJD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KDM6B per lo studio della segnalazione di JMJD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KDM6B critici per la funzione di JMJD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KDM6B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal JMJD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal JMJD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KDM6B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal JMJD3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR JMJD3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KDM6B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KDM6B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.