JAK3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400835-ACT

JAK3 (Janus kinase 3) è una tirosin-chinasi non recettoriale che si associa alla catena γ comune (IL2RG) e trasduce segnali provenienti da molteplici recettori delle interleuchine, tra cui IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21. In seguito alla stimolazione da parte delle citochine, JAK3 attiva le proteine STAT a valle e coordina programmi trascrizionali che controllano lo sviluppo, l’attivazione e la sopravvivenza dei linfociti, collegando la segnalazione JAK–STAT all’omeostasi immunitaria. Un’attività o un’espressione disregolata di JAK3 altera le reti di segnalazione citochinica ed è stata implicata in fenotipi di immunodeficienza primaria, oltre che nella segnalazione aberrante osservata nelle neoplasie ematologiche. Poiché la funzione di JAK3 è strettamente legata alle decisioni sul destino delle cellule immunitarie, è ampiamente studiata nei pathway che regolano la biologia delle cellule T e NK e la segnalazione infiammatoria.

JAK3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JAK3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JAK3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JAK3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JAK3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JAK3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JAK3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JAK3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JAK3 nelle cellule tumorali con espressione di JAK3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.