JAB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401302-ACT

COPS5 codifica JAB1 (nota anche come CSN5), una subunità catalitica del signalosoma COP9 che regola le ubiquitina ligasi cullin-RING tramite deneddilazione, contribuendo così a modellare la proteostasi e la progressione del ciclo cellulare. Modulando il turnover ubiquitina-dipendente di proteine chiave di segnalazione e dei checkpoint, JAB1 influenza vie collegate alle risposte al danno al DNA, al controllo trascrizionale e all’adattamento allo stress cellulare. JAB1 interagisce inoltre con la segnalazione dei recettori nucleari e con programmi trascrizionali legati all’immunità, aiutando a coordinare l’espressione genica in modo dipendente dal contesto. Un’attività deregolata di COPS5/JAB1 è stata associata ad alterazioni della proliferazione, della segnalazione di sopravvivenza e a fenotipi invasivi in diversi modelli rilevanti per il cancro, rendendola un bersaglio frequente per studi meccanicistici dei circuiti oncogenici.

JAB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COPS5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JAB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COPS5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COPS5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JAB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COPS5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JAB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JAB1 nelle cellule tumorali con espressione di COPS5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.