ITM1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-421187-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ITM1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ITM1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase ITM1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Stt3a. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ITM1 Anticorpo (A-2): sc-390227
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ITM1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-421187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ITM1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-421187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O Stt3a de camundongo codifica uma subunidade catalítica do complexo oligosacariltransferase (OST), que medeia a glicosilação N‑ligada co-traducional de polipeptídeos recém-sintetizados no retículo endoplasmático. Ao transferir oligossacarídeos previamente montados para resíduos de asparagina dentro do motivo consenso NXS/T, a STT3A contribui para o dobramento proteico, o controle de qualidade e o tráfego de proteínas, além de influenciar a homeostase do RE e as redes de proteostase. A perturbação da glicosilação dependente de STT3A pode remodelar a resposta ao estresse do RE, o desempenho da via secretória e a composição de glicoproteínas na superfície celular, com consequências a jusante para a sinalização e o reconhecimento imune. A N‑glicosilação desregulada e a função do OST são amplamente relevantes para estudos de distúrbios congênitos da glicosilação, estresse metabólico e remodelação de glicoproteomas associada ao câncer, apoiando pesquisas mecanísticas em vias ligadas a doenças sem implicar utilidade clínica.
ITM1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Stt3a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Stt3a. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Stt3a. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Stt3a interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.