Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ITM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405155
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ITM1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ITM1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ITM1 Antibody (A-2): sc-390227
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ITM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405155 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La STT3A umana codifica la subunità catalitica del complesso oligosaccariltransferasi (OST), che media la glicosilazione N‑legata co‑traduzionale nel reticolo endoplasmatico. Trasferendo oligosaccaridi preassemblati a residui di asparagina all’interno di polipeptidi nascenti, STT3A favorisce il ripiegamento proteico, il controllo qualità e il traffico intracellulare, e influenza la degradazione associata al RE e la proteostasi. Alterazioni della glicosilazione dipendente da STT3A possono compromettere la maturazione delle proteine di membrana e secrete, modificare la segnalazione recettoriale e immunitaria e attivare la risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response). Vie di N‑glicosilazione deregolate sono state associate a disordini congeniti della glicosilazione e vengono frequentemente rimodellate nel cancro e in altre malattie caratterizzate da stress del RE e da glicoproteomi di superficie cellulare alterati.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ITM1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STT3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STT3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STT3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ITM1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STT3A per lo studio della segnalazione di ITM1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni STT3A critici per la funzione di ITM1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STT3A per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ITM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ITM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STT3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ITM1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ITM1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STT3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STT3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.