ISCA1 Plasmide Double Nickase (m): sc-427272-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ISCA1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ISCA1 Double Nickase Plasmid (m) e il ISCA1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Isca1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ISCA1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-427272-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ISCA1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-427272-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino ISCA1 (Isca1) codifica una proteina mitocondriale di tipo A coinvolta nella maturazione dei cluster ferro–zolfo (Fe–S), supportando la biogenesi dei cofattori [4Fe–4S] richiesti dai componenti della catena respiratoria e da numerosi enzimi metabolici. Attraverso il suo ruolo nelle fasi tardive dell’assemblaggio dei Fe–S, ISCA1 contribuisce alla fosforilazione ossidativa, all’omeostasi redox e al mantenimento della funzione mitocondriale in condizioni cellulari di ferro variabili. L’alterazione delle vie dei cluster Fe–S può destabilizzare il mantenimento del genoma mitocondriale e il trasporto di elettroni, collegando la disfunzione correlata a ISCA1 a fenotipi di stress bioenergetico rilevanti per i meccanismi di malattie neuroevolutive e neuromuscolari. Di conseguenza, Isca1 è spesso studiato nel contesto del metabolismo mitocondriale, della segnalazione di stress e delle reti enzimatiche dipendenti dai Fe–S.
ISCA1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Isca1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Isca1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Isca1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Isca1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.