Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IRBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403810
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IRBP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IRBP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IRBP Antibody (A-12): sc-376225
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IRBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403810 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RBP3 codifica la proteina legante i retinoidi dell’interfotorecettore (IRBP), una grande glicoproteina secreta prodotta dai fotorecettori che si accumula nella matrice interfotorecettoriale e lega i retinoidi. IRBP mantiene l’omeostasi del ciclo visivo facilitando il trasporto e lo scambio extracellulari di retinoidi 11-cis e all-trans tra i fotorecettori e l’epitelio pigmentato retinico, contribuendo al recupero della fototrasduzione e alla protezione dallo stress ossidativo mediato dai retinoidi. Attraverso queste attività, IRBP influenza il metabolismo dei retinoidi, il traffico di lipidi/retinoidi e processi associati alla matrice extracellulare, tutti fondamentali per la funzione retinica. Alterazioni dell’espressione o della funzione di RBP3/IRBP sono state associate a fenotipi di disfunzione retinica e sono oggetto di studio nel contesto dei meccanismi delle patologie oculari degenerative e infiammatorie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRBP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RBP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RBP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RBP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRBP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RBP3 per lo studio della segnalazione di IRBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RBP3 critici per la funzione di IRBP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RBP3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IRBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IRBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RBP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IRBP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IRBP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RBP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RBP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.