IPMK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427508

Panoramica

Il gene murino Ipmk codifica l’inositolo polifosfato multichinasi (IPMK), un enzima multifunzionale che fosforila gli inositol fosfati e contribuisce alla generazione di inositol polifosfati di ordine superiore coinvolti nella trasduzione del segnale. IPMK si colloca all’interfaccia tra il metabolismo dei fosfoinositidi e quello degli inositol fosfati, con effetti sulla segnalazione nucleare, sulla regolazione trascrizionale e su vie dell’omeostasi energetica cellulare quali PI3K/AKT e la segnalazione associata a mTOR. Attraverso questi ruoli, IPMK influenza processi tra cui il controllo della crescita, le risposte allo stress e la regolazione metabolica, ed è stato studiato in contesti in cui una deregolazione della segnalazione degli inositol fosfati è collegata a reti di segnalazione associate al cancro e a fenotipi di malattie metaboliche. L’ampia connettività di via rende Ipmk un bersaglio utile per analizzare come i messaggeri derivati dall’inositolo coordinino l’espressione genica e le decisioni sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IPMK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ipmk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ipmk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ipmk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IPMK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ipmk per lo studio della segnalazione di IPMK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ipmk critici per la funzione di IPMK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ipmk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IPMK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IPMK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ipmk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IPMK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IPMK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ipmk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ipmk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.