INSIG-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401381-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- INSIG-1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il INSIG-1 Double Nickase Plasmid (h) e il INSIG-1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira INSIG1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: INSIG-1 Antibody (A-9): sc-390504
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
INSIG-1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INSIG-1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INSIG1 codifica l’Insulin Induced Gene 1 (INSIG-1), una proteina di membrana del reticolo endoplasmatico che funge da sensore degli steroli e da regolatore negativo chiave dell’omeostasi lipidica. INSIG-1 si lega a SCAP e alle proteine leganti l’elemento regolatore degli steroli (SREBP) per trattenere il complesso SCAP–SREBP nel RE in condizioni di abbondanza di steroli, limitando così la maturazione delle SREBP e la conseguente trascrizione dei geni biosintetici del colesterolo e degli acidi grassi. Attraverso questo punto di controllo, INSIG-1 integra la regolazione a feedback nelle vie del mevalonato e della lipogenesi e si interseca con la degradazione associata al RE dei componenti della via degli steroli. La disregolazione del sensing degli steroli mediato da INSIG1 è stata studiata in fenotipi metabolici quali dislipidemia, steatosi epatica e insulino-resistenza, ed è rilevante anche in contesti in cui un metabolismo lipidico alterato supporta l’adattamento cellulare allo stress.
INSIG-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus INSIG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di INSIG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di INSIG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con INSIG1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.