ING2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404193-ACT

ING2 (inhibitor of growth family member 2) è una proteina associata alla cromatina, collegata alla funzione di soppressore tumorale, che agisce come “lettore” della trimetilazione della lisina 4 dell’istone H3 (H3K4me3) tramite il suo dominio PHD finger, contribuendo ad accoppiare lo stato epigenetico al controllo della trascrizione. Nelle cellule umane, ING2 partecipa al rimodellamento della cromatina e al bilanciamento dell’acetilazione/deacetilazione degli istoni attraverso interazioni con complessi contenenti HDAC, influenzando così la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e l’apoptosi. Interagisce inoltre con la segnalazione di stress dipendente da p53 e contribuisce al mantenimento della stabilità genomica. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ING2 sono state associate a proliferazione disregolata e a riprogrammazione epigenetica osservate in molteplici contesti oncologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla segnalazione oncogenica e sulla regolazione della cromatina.

ING2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ING2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ING2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ING2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ING2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ING2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ING2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ING2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ING2 nelle cellule tumorali con espressione di ING2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.