IMP-1/IGF2BP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401703-ACT

IGF2BP1 (IMP-1) è una proteina legante l’RNA che riconosce la N6-metiladenosina (m6A) e altre caratteristiche di sequenza/struttura per regolare la localizzazione, la stabilità e la traduzione dell’mRNA durante lo sviluppo e in risposta allo stress cellulare. Modulando il destino di trascritti legati alla crescita e al metabolismo, IGF2BP1 influenza programmi che controllano proliferazione, migrazione e transizione epitelio-mesenchimale, interfacciandosi con reti di segnalazione come PI3K–AKT–mTOR e MAPK tramite l’espressione dei bersagli a valle. Un’espressione aberrante di IGF2BP1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è associata a un controllo post-trascrizionale alterato di mRNA oncogenici e pro-sopravvivenza. Inoltre, la regolazione dell’RNA dipendente da IGF2BP1 è rilevante per fenotipi di tipo staminale e per il rimodellamento dello stato cellulare, supportando studi meccanicistici delle reti di regolazione genica.

IMP-1/IGF2BP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGF2BP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IMP-1/IGF2BP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGF2BP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGF2BP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IMP-1/IGF2BP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGF2BP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IMP-1/IGF2BP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IMP-1/IGF2BP1 nelle cellule tumorali con espressione di IGF2BP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.