IL-7R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401536-ACT

IL7R umano codifica la subunità alfa del recettore dell’interleuchina-7 (IL-7R/CD127), una subunità recettoriale per citochine che si associa alla catena γ comune per mediare una segnalazione dipendente da IL-7 essenziale per la timopoiesi, la sopravvivenza dei linfociti T periferici e la proliferazione omeostatica. L’attivazione di IL-7R induce JAK1/JAK3 e i programmi trascrizionali a valle mediati da STAT5, con un’ulteriore connessione alle vie PI3K–AKT e MAPK che modellano metabolismo e differenziamento dei linfociti. Le dinamiche di espressione di IL7R contribuiscono a definire i sottotipi linfocitari e gli stati di attivazione immunitaria, e un’alterata regolazione o segnalazione di IL7R è stata collegata a fenotipi di disregolazione immunitaria e a studi di associazione genetica in ambito di autoimmunità e malattie infiammatorie. In quanto recettore di superficie cellulare, IL-7R è frequentemente studiato per il traffico recettoriale, la cinetica di risposta al ligando e il controllo trascrizionale dell’impegno di linea nelle cellule immunitarie.

IL-7R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL7R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-7R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL7R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL7R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-7R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL7R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-7R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-7R nelle cellule tumorali con espressione di IL7R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.